公元1527年初春，教皇克雷芒七世需要罗马人的鼎力相助，他一定在恨自己当初没有对罗马人再好一些。波旁正率领军队急速前往罗马城，克雷芒七世终于按捺不住心中的恐慌，在卡比托利欧山上的圣玛丽亚教堂里召开协商会议，求助全体罗马人。他请求罗马人去战斗，并向他们保证，只要他们咬紧牙关死守三天，就能等来盟军的救兵。
公元1527年5月5日下午，罗马人看到一支大军向罗马城攻来。这支大军包括700名枪骑兵、800名轻骑兵、3000名意大利雇佣兵、5000名西班牙士兵和1万名德意志雇佣兵。这是许多个世纪以来，罗马城首次被如此庞大的军队围困。这支约2万人的围城部队是罗伯特·圭斯卡德的围城部队的5倍。但是，罗马人的处境却比预想中的好。仅在8个月前，蓬佩奥·科隆纳率军攻入罗马城，罗马人还抱着幸灾乐祸的心态。而现在，罗马人决定回应克雷芒七世的号召，一致对外。他们一致表态：将与教皇同生共死，要像战神玛尔斯之子一样战斗。罗马人思想的转变似乎与蓬佩奥的那次突袭有关。克雷芒七世无端受辱，罗马人对他生出同情之心。
罗马全城戒备。面对这支没有大炮的帝国军，斑驳陈旧的城墙称得上一道坚固的屏障。克雷芒七世曾先后两次撤军，好在守城的兵源还算充足。不少平民被富人偷偷借调去守卫自家的宫殿，剩下的平民则加入守城的队伍中。守城的士兵还包括4000名正规军士兵、2000名瑞士卫队士兵和2000名黑军战士。这支黑军军团是意大利最精锐的部队，是令敌人闻风丧胆的存在，曾由克雷芒七世的堂弟朱利亚诺统率，朱利亚诺已于几个月前去世，好在克雷芒七世手下还有伦佐·迪·切里这员猛将。三年前，波旁率领帝国军围困马赛长达一个月之久，伦佐重挫帝国军，令帝国军颜面扫地，波旁无奈之下只好下令撤退。种种迹象表明，伦佐这次能取得更大的胜利。帝国军一没足够的粮食，二没稳固的营帐，过不了多久他们就会知难而退。加之盟军的援军不日就要抵达，帝国军很可能落得个灰溜溜撤军去那不勒斯的下场。
留给守将伦佐布防的时间并不多，但是他娴熟地完成了布防任务。考虑到波旁的帝国军会从城北和城西发起攻击，科隆纳的军队会从城南发起攻击，他在奥勒良城墙的南段和东段部署了战斗力最弱的平民军，平民军里甚至还混杂着一些修道士和神父。他把最精锐的部队部署在博尔戈、台伯河岸区和奥勒良城墙北段，因为这三个地区直接受到帝国军的威胁。伦佐意识到博尔戈是罗马城的软肋，圣斯皮里托门周边的地区是博尔戈最大的部分，这一地区的城墙不仅比其他地区的城墙低矮很多，而且正对着高地。8个月前，蓬佩奥·科隆纳率军越过圣斯皮里托门旁的城墙，攻入罗马城。伦佐在城中部署了多门火炮，危险区域都在火炮的射程之内。他把重型火炮都部署在圣天使堡，他还计划把台伯河上的桥都炸掉，一旦博尔戈和台伯河岸区失守，这样做便可保河对岸无虞。罗马人不忍心看着好端端的罗马城一分为二，就阻止了伦佐的计划。用不了多久，他们就会为这个决定而追悔莫及。
公元1527年5月5日夜，近2万士兵组成的帝国军在马里奥山上生起营火，罗马守军看得一清二楚。卡比托利欧山是罗马城在古代的堡垒，有人敲响了卡比托利欧山上的大钟，向罗马人发出警报。“战斗！战斗！”罗马人的呼喊声从山下的大街小巷里传来。罗马人此刻最怕的是背叛。城中有大批科隆纳的支持者，罗马人的担忧不无道理。后来发生的事情证明，真正将罗马人推向危险境地的并不是蠢蠢欲动的科隆纳支持者，而是帝国军主帅波旁的意外殉国，这是罗马守军和帝国军都始料未及的。
